子科生物報道：解放軍疾病預防控制中心宋宏彬研究員團隊利用LwCas13a聯(lián)合PCR擴增技術建立了乙肝病毒DNA及其常見耐藥突變YMDD檢測新方法PCR-CRISPR，該技術為乙肝病毒尤其是低病毒載量樣本的高效檢測提供了有力工具。

慢性乙型肝炎是目前最突出的全球性公共衛(wèi)生問題之一，嚴重威脅人類健康。盡管乙肝疫苗的使用有效降低了乙肝的發(fā)病率，每年仍有1-3千萬人感染乙肝病毒，約有1百萬人死于乙肝感染及其并發(fā)癥。
近年來，新的RNA靶向技術CRISPR-Cas13a已被開發(fā)為一種可檢測痕量核酸的高靈敏、高特異性檢測技術，通過結合RPA等溫擴增技術可實現(xiàn)對單拷貝核酸和單堿基突變的準確檢測和鑒定。課題組將臨床檢測中使用更加廣泛的PCR擴增技術與Cas13a相結合，設計分別針對乙肝病毒DNA及YMDD耐藥突變的特異性crRNA，實現(xiàn)了對低至單拷貝的HBV DNA及YMDD耐藥突變的高靈敏度檢測。
血清樣本檢測結果顯示，新建立的PCR-CRISPR方法和數(shù)字PCR在10例qPCR判定為陰性的血清樣本中檢測出HBV DNA，表明該技術對HBV DNA檢測的靈敏度明顯高于qPCR。在針對YMDD耐藥突變的檢測中，PCR-CRISPR在12例HBV DNA濃度低于100IU/mL的血清樣本中檢測出了qPCR和直接測序法均未檢測到的YMDD耐藥突變（4例YVDD和8例YIDD），充分表明該技術靈敏度較qPCR高，且更適用于低濃度HBV DNA樣本的檢測。
PCR-CRISPR技術實現(xiàn)了低載量HBV樣本中病毒核酸和YMDD耐藥突變的高靈敏檢測，對于降低輸血和肝移植中HBV感染的風險、減少抗病毒治療停藥后的乙肝復發(fā)率等具有重要的臨床指導意義。該研究發(fā)表在今年近期出版的國際專業(yè)學術期刊《Clinical Microbiology and Infection》上。

原文檢索：
Highly sensitive and specific detection of HBV DNA and drug resistance mutations utilizing the PCR-based CRISPR-Cas13a system